中药有效成分渔用抗菌剂

1、一种中药有效成分渔用抗菌剂，其特征在于，抗菌剂为水剂，其组分及质量百分 含量分别为没食子酸10～12％、黄酮类4～5％、蒽醌类1～2％，其余为水；
其中，黄酮类是黄芩苷或槲皮素或二者任意比例的混合物，蒽醌类是1，8-二羟基蒽醌 或大黄素或芦荟大黄素或三者任意比例的混合物。

技术领域\n本发明涉及兽药技术领域，特别是涉及一种中药有效成分渔用抗菌剂。\n背景技术\n目前控制水产动物细菌性疾病的主要手段是使用抗菌药物，而使用化学抗菌药物、抗 生素药物普遍存在易引发病原菌耐药性、导致养殖鱼类药物残留超标等问题，因此国内外 都在寻找更加安全有效的代用品。我国有使用中药防治水产动物疾病的传统，中药因具有 资源丰富，残留少，副作用小等优势，符合无公害水产养殖要求等普遍认可的特点，已经 成为人类研究防治水产动物疾病药物的主要材料。但从国内外有关防治水产动物细菌性疾 病的报道中可见，相关试验大多数停留在中药单方和验方的抑菌和应用上，缺少对中药配 方及有效成分配方的研究。由于从中药中提取有效成分(化合物单体)难度很大，找到有 效部位(大类物质)十分困难，使现有渔用中药在有效成分的化学物质基础描述上存在很 大的模糊性，技术含量较低。只有使用先进的技术，现代分离手段，才能将复方中药分离 为各个有效部分，并从中提取分离到有效成分。从已有中药中提取分析有效成分，从而采 用人工方法合成，可以大幅度减少药物筛选的人力和财力，也能极方便地运用于生产中。 到目前为止，尚未见有关中药有效成分组成的渔用抗菌剂的研究报道。\n发明内容\n本发明的目的在于，克服现有抗菌药物存在的易引发病原菌耐药性、导致养殖鱼类药 物残留超标、不符合无公害水产养殖要求等问题，提供一种中药有效成分渔用抗菌剂，其 组分全部是纯中药有效成分，同时具有广谱抗菌作用。\n本发明的中药有效成分渔用抗菌剂为水剂，其组分及质量百分含量分别为没食子酸 10～12％、黄酮类4～5％、蒽醌类1～2％，其余为水；\n其中，黄酮类是黄芩苷或槲皮素或二者任意比例的混合物，蒽醌类是1，8-二羟基蒽醌 或大黄素或芦荟大黄素或三者任意比例的混合物。\n本发明的中药有效成分渔用抗菌剂的制备方法如下：\n方法一：因该中药有效成分渔用抗菌剂的各组分：没食子酸、黄芩苷、槲皮素、1，8- 二羟基蒽醌、大黄素以及芦荟大黄素等均可从市场购买，故最简单的方法是直接购买商用 中药有效成分各单体，按上述配方混合，即制成抗菌剂。\n方法二：采用乙醇加热连续回流提取等方法，从富含没食子酸、黄酮类、蒽醌类的中 药中提取这些有效成分。分别从斑地锦中提取没食子酸等有效成分、从苦参中提取黄酮类 等有效成分、从大黄中提取蒽醌类等有效成分。取各单方中药分别提取其有效成分，按W： V＝1：8的比例加入浓度为70％的乙醇，用盐酸调节pH值为2，76℃下用索氏提取仪回流 提取90分钟，收取液体，残渣再重复提取两次，合并抽提液，挥发至无醇味且干燥成粉。 将获得的提取物没食子酸、黄酮类、蒽醌类干粉及水按上述比例混合，即制成抗菌剂。因 各成分提取方法相同，各中药单方也可按相应比例合并提取。按照斑地锦：苦参：大黄＝ 5：3：1的质量比例混合提取其有效成分，取混合物2克，可制成100ml抗菌剂。该方法 成本较低。用高效液相色谱法提取斑地锦中没食子酸得率可达到29.8％。\n方法二所提中药有效成分的鉴定方法如下：\n抗菌剂有效成分的薄层色谱鉴定：用硅胶GF2540和0.5％的羧甲基纤维素钠制板， 苯：乙醇：甲酸(7：3：1)为展开剂，氨熏—三氯化铁日光下显色，测量抗菌剂各成分点的 比移值Rf。按Rf值大小排列，抗菌剂有效成分分别为没食子酸、槲皮素、黄芩苷、芦荟 大黄素、大黄素和1-8二羟基蒽醌。\n方法二所提中药有效成分的分离方法如下：\n柱层析分离各有效成分：用柱层析硅胶干法装柱，苯：乙醇：甲酸(7：3：1)为洗 脱剂，用自动收集仪收集分离样品，每间隔一分钟收集一个样品，且用薄层分析(TLC) 跟踪检测，同时合并相同斑点的洗脱液。柱层析分离共收集到抗菌剂77个样品，对比可 知按洗脱顺序样品1～11是1，8二-羟基蒽醌、12～15是大黄素、17～21是芦荟大黄素、 24～30是黄芩苷、33～47是槲皮素、49～77是没食子酸。\n                  \n1，8-二羟基葸醌        大黄素              芦荟大黄素\n            \n黄芩苷                  槲皮素              没食子酸\n该抗菌剂的使用方法如下：\n使用时，抗菌剂拌饵剂量按0.25％～0.5％的比例添加在饲料中，即100ml抗菌剂混合 在400～200g饲料中；口服和注射剂量为0.5～2.0ml/kg·d，即按每天每公斤鱼体重给予的 抗菌剂剂量为0.5～2.0ml。\n抗菌剂各有效成分的抑菌活性顺序为没食子酸>蒽醌(包含1-8二羟基蒽醌、大黄素、 芦荟大黄素)>黄芩苷>槲皮素。联合用药研究表明，没食子酸和蒽醌具有协同作用，没食 子酸和黄芩苷、没食子酸和槲皮素、蒽醌和黄芩苷三组同属于累加作用。\n本发明具有以下优点：\n(1)抗菌剂具有广谱抗菌作用，对迟钝爱德华氏菌、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、 杀鲑气单胞菌、鲁克氏耶尔森氏菌、柱状屈挠杆菌等水产动物常见致病菌的体外抑菌效果 明显，抑菌环直径可达到2.0～4.0之间。\n(2)抗菌剂能有效地防治水产动物细菌性疾病，药效试验表明对温和气单胞菌等常 见致病菌的防治率在80％～95％之间，总体防治率可达到85％以上。酸性磷酸酶和碱性磷 酸酶活性测定显示抗菌剂可以明显增强鱼体的非特异性免疫能力；谷丙转氨酶、谷草转氨 酶、胆碱酯酶、肌酐和尿酸等生化指标测定显示抗菌剂对患病鱼受损的肝脏、肾功能和鱼 机体均有明显的改善作用。\n(3)抗菌剂安全无毒\n采用急性毒性试验进行抗菌剂安全性测定，急性毒性的分级标准LD50>10mg/kg为无 毒。试验抗菌剂给药量达到10000mg(生药)/kg时鱼体依然未出现中毒，表明抗菌剂对鱼体 属于实际无毒级。\n具体实施方式\n实施例1：\n购买商用中药有效成分各单体：没食子酸、黄酮类(黄芩苷、槲皮素)、蒽醌类(1，8- 二羟基蒽醌、大黄素或芦荟大黄素)，按没食子酸10％、黄酮类(黄芩苷：槲皮素为1：1) 4％、蒽醌类(1，8-二羟基蒽醌：大黄素：芦荟大黄素为1：1：1)1％，其余为水的比例混 合，即制成抗菌剂。抑菌实验表明，对柱状屈挠杆的抑菌环直径达2.0，药效试验表明对 柱状屈挠杆菌等常见致病菌的防治率达80％。\n实施例2：\n购买商用中药有效成分各单体：没食子酸、黄酮类(黄芩苷、槲皮素)、蒽醌类(1，8- 二羟基蒽醌、大黄素或芦荟大黄素)，按没食子酸11％、黄芩苷4.5％、1，8-二羟基蒽醌1.5％， 其余为水的比例混合，即制成抗菌剂。抑菌实验表明，对温和气单胞菌的抑菌环直径达到 3.0，药效试验表明对温和气单胞菌等常见致病菌的防治率达90％。\n实施例3：\n购买商用中药有效成分各单体：没食子酸、黄酮类(黄芩苷、槲皮素)、蒽醌类(1，8- 二羟基蒽醌、大黄素或芦荟大黄素)，按没食子酸12％、槲皮素5％、大黄素2％，其余为 水的比例混合，即制成抗菌剂。抑菌实验表明，对迟钝爱德华氏菌的抑菌环直径达到4.0， 药效试验表明对迟钝爱德华氏菌等常见致病菌的防治率达95％。\n实施例4：\n取各单方中药斑地锦、苦参、大黄，分别提取其有效成分，按W：V＝1：8的比例加 入浓度为70％的乙醇，用盐酸调节pH值为2，76℃下用索氏提取仪回流提取90分钟，收 取液体，残渣再重复提取两次，合并抽提液，挥发至无醇味且干燥成粉。将获得的提取物 按没食子酸10％、黄酮类5％、蒽醌类1％，其余为水的比例混合，即制成抗菌剂。抑菌实 验表明，对鲁克耶尔森氏菌的抑菌环直径达到2.0，药效试验表明对鲁克耶尔森氏菌等常 见致病菌的防治率达80％。\n实施例5：\n取各单方中药斑地锦、苦参、大黄，分别提取其有效成分，按W：V＝1：8的比例加 入浓度为70％的乙醇，用盐酸调节pH值为2，76℃下用索氏提取仪回流提取90分钟，收 取液体，残渣再重复提取两次，合并抽提液，挥发至无醇味且干燥成粉。将获得的提取物 按没食子酸12％、黄酮类5％、蒽醌类2％，其余为水的比例混合，即制成抗菌剂。抑菌实 验表明，对杀鲑气单胞菌的抑菌环直径达到4.0，药效试验表明对杀鲑气单胞菌等常见致 病菌的防治率达95％。\n实施例6：\n取各单方中药斑地锦、苦参、大黄，按照斑地锦：苦参：大黄＝5：3：1的比例混合 提取其有效成分。取混合物2克，按W：V＝1：8的比例加入浓度为70％的乙醇，用盐酸 调节pH值为2，76℃下用索氏提取仪回流提取90分钟，收取液体，残渣再重复提取两次， 合并抽提液，加水至100ml，即制成抗菌剂。经测定，没食子酸、黄酮类、蒽醌类的含量 分别为10.47％、4.2％、1.51％。抑菌实验表明，对嗜水气单胞菌的抑菌环直径达到3.5， 药效试验表明对嗜水气单胞菌等常见致病菌的防治率达92％。