用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物、制备方法及用途

1.一种用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物制备方法，特征在于：包括以下步骤：
1）将绿萝花药材用1～5倍重量石油醚、乙醚或汽油回流提取2～5次，得到小极性溶剂回流液和残渣Ⅰ；
2）将残渣Ⅰ用1～3倍重量50～90%乙醇或甲醇回流提取2～5次，得到醇溶剂回流液和残渣Ⅱ；
3）将残渣Ⅱ用1～3倍重量水回流提取2～5次，得到水提取液；
4）将醇溶剂回流液回收至无醇味，用1～3倍体积乙酸乙酯萃取3～5次，得到乙酸乙酯萃取液和母液Ⅰ；
5）将母液Ⅰ用水饱和过的1～3倍体积正丁醇萃取3～5次，得到正丁醇萃取液和母液Ⅱ；
6）分别回收小极性溶剂回流液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液和水提取液至干分别得到小极性提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶性部分。
2.根据权利要求1所述的方法制备的用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物，其特征在于：包括小极性提取部分和乙酸乙酯提取部分一种或两种的组合物。
3.权利要求1或2所述的用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用。

用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物、制备方法及用途\n技术背景\n[0001] 糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症，是糖尿病全身性微血管病变表现之一，临床特征为蛋白尿，渐进性肾功能损害，高血压，水肿，晚期出现严重肾功能衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一。近年来随着我国人口人均寿命延长，生活饮食习惯，结构的改变，糖尿病的患病率呈直线上升趋势，且由于治疗方法的改善，生存时间的增加，从而肾脏及其它并发症也增加。据最新统计，我国目前约有5000万人正面临着糖尿病的威胁。在美国，糖尿病肾病占终末期肾功能衰竭的首位，约为35%～38%。Ⅰ型（IDDM）糖尿病发生糖尿病肾病比例较高，约为35%～50%，Ⅱ型（NIDDM）发生率约20%左右。藏药滇结香（Edgeworthia gardneri），为瑞香科（Thymelaeaceae）结香属植物，花蕾、根河茎皮均可入药。其中花蕾称为绿萝花，据记载，绿萝花主治糖尿病、冠心病、高血压、高血脂、血管炎、脉管炎等。现代药理研究表明，绿萝花醇提取物的乙酸乙酯萃取部分有较强的α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化作用；正丁醇萃取部分有较强的抗氧化作用。但目前对于绿萝花提取物的药理学报道较少，尤其是绿萝花提取物在治疗糖尿病肾病方面还未见相关报道。\n发明内容\n[0002] 为了解决上述问题，本发明提供了一种用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物、制备方法及用途。\n[0003] 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病微血管并发症之一，随着糖尿病发病率的上升，DN 已成为终末期肾病的主要病因，探讨其发病机制与防治方法具有重要的临床意义和社会意义。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxi-some proliferator-activated receptor,PPAR)是核受体超家族中配体激活的转录因子之一，有3种亚型：PPARа、PPARβ、PPARγ。\n[0004] 研究发现, PPARβ分布相当广泛,在胰岛、心肌、骨骼肌、脂肪组织、皮肤、脑组织中均有较高表达。研究还发现在骨骼肌、心肌、脂肪组织中, PPARβ均能够增强脂肪酸的氧化和利用,是脂肪酸氧化酶的上游调节因子。因此 PPARβ被看作代谢综合征的新的强有力的治疗靶点。但是也有研究发现,在巨噬细胞中 PPARβ能够促进胆固醇内流和脂质沉积。这些研究提示 PPARβ在脂质代谢中的作用具有组织特异性。脂毒性导致的胰岛β细胞功能障碍是代谢综合征发病的中心环节之一,改善胰岛β细胞脂代谢可能对代谢综合征的防治起着重要作用。\n[0005] 更重要的是，PPARγ激活可抑制肾系膜细胞的各种病理变化。系膜细胞在肾脏疾病中起重要作用，在高糖刺激下，系膜细胞经历从静止期表型到肌成纤维细胞样增殖表型的去分化过程，表现为а-平滑肌肌动蛋白增加、细胞外基质合成增加，这种表现型的改变是糖尿病肾病发生的基本特征。此外，PPARγ激活剂还能影响其它一些在糖尿病肾病发病机理中起重要作用的物质，如单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)等。\n糖尿病肾病时，大量单核细胞在肾小球、肾小管间质浸润与细胞外基质积聚、肾小球硬化相关。高糖状态下肾小球和系膜细胞中PKC和MAPK活性升高是糖尿病肾病发病机制中的重要因素,PPARγ激活剂以剂量依赖方式抑制PKC和MAPK活性。\n[0006] 本发明申请将绿萝花的不同极性部位的提取物开展了PPA受体细胞模型活性评价，筛选出对PPARβ及PPARγ激活作用明显的极性部位提取物作为用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物；具体为:\n[0007] 用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物制备方法，包括以下步骤：\n[0008] 1）将绿萝花药材用1～5倍重量石油醚、乙醚或汽油回流提取2～5次，得到小极性溶剂回流液和残渣Ⅰ；\n[0009] 2）将残渣Ⅰ用用1～3倍重量50～90%乙醇或甲醇回流提取2～5次，得到醇溶剂回流液和残渣Ⅱ；\n[0010] 3）将残渣Ⅱ用用1～3倍重量水回流提取2～5次，得到水提取液；\n[0011] 4）将醇溶剂回流液回收至无醇味，用1～3倍体积乙酸乙酯萃取3～5次，得到乙酸乙酯萃取液和母液Ⅰ；\n[0012] 5）将母液Ⅰ用水饱和过的用1～3倍体积正丁醇萃取3～5次，得到正丁醇萃取液和母液Ⅱ；\n[0013] 6）分别回收小极性溶剂回流液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液和水提取液至干分别得到小极性提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶性部分。\n[0014] 用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物，包括小极性提取部分和乙酸乙酯提取部分一种或两种的组合物。\n[0015] 用于治疗糖尿病肾病的绿萝花提取物在治疗糖尿病肾病中的应用。\n[0016] 本发明的有益技术效果是：本发明申请提供了绿萝花用于治疗糖尿病肾病活性部位，为开发新的剂型改善或改变给药途径创造了条件。\n附图说明\n[0017] 图1 不同浓度PE对PPARβ的相对激活效应；\n[0018] 图2不同浓度EA对PPARβ的相对激活效应；\n[0019] 图3不同浓度NB对PPARβ的相对激活效应；\n[0020] 图4不同浓度RA对PPARβ的相对激活效应；\n[0021] 图5不同浓度PE对PPARγ的相对激活效应；\n[0022] 图6不同浓度EA对PPARγ的相对激活效应；\n[0023] 图7不同浓度NB对PPARγ的相对激活效应；\n[0024] 图8不同浓度RA对PPARγ的相对激活效应。\n具体实施方式\n[0025] 实施例1\n[0026] 称取将绿萝花药材1.1kg用3石油醚回流提取3次，得到小极性溶剂回流液和残渣Ⅰ；\n[0027] 将小极性溶剂回流液TLC分析，在254nm及365nm下均无特别明显斑点，且喷浓硫酸-香草醛显色剂显黄色（条带拖尾），判断该部分中主要含有脂肪酸及其酯类化合物。\n[0028] 将残渣Ⅰ用70%乙醇或甲醇回流提取3次，得到醇溶剂回流液和残渣Ⅱ；\n[0029] 将醇溶剂回流液采用盐酸-镁粉显色反应进行检识，同时采用分光光度法，以芦丁做对照，测定吸光度，对提取物进行分析，结果判定该组分含有黄酮类化合物。\n[0030] 将残渣Ⅱ用水回流提取3次，得到水提取液；\n[0031] 将醇溶剂回流液回收至无醇味，用2倍体积乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取液和母液Ⅰ；\n[0032] 将乙酸乙酯萃取液采用盐酸-镁粉显色反应进行检识，同时采用分光光度法，以芦丁做对照，测定吸光度，乙酸乙酯萃取部位具有较强的蓝色荧光，则含有香豆素类化合物。\n[0033] 将母液Ⅰ用水饱和过的用2倍体积正丁醇萃取3次，得到正丁醇萃取液和母液Ⅱ；\n[0034] 分别回收小极性溶剂回流液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液和水提取液至干分别得到小极性提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶性部分。\n[0035] 其中，小极性提取部分命名为：PE，乙酸乙酯提取部分命名为：EA，正丁醇提取部分命名为：NB，水溶性部分命名为：RA。\n[0036] 实施例2\n[0037] 对实施例1中制备得到的PE、EA、 NB以及RA进行PPARβ及PPARγ的激活效应评价。具体结论见图1-8；结果显示PE、EA、NB及RA均有激活PPARβ及PPARγ的作用，其中PE和EA部分效果明显。