一种水产品中氯霉素化学发光酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

1.一种氯霉素的化学发光酶联免疫分析试剂盒，其特征是由(1)包被有包被抗原的微孔板，(2)氯霉素标准品，(3)酶标抗体工作液，(4)缓冲液，(5)洗涤液，(6)发光液组成。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是包被抗原(1)是由氯霉素小分子和载体蛋白(牛血清白蛋白BSA)通过EDC(碳二亚胺)法偶联制成的完全抗原。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是酶标氯霉素抗体(3)该酶标抗体是将辣根过氧化物酶通过过碘酸钠法与氯霉素抗体连接，形成酶标抗体。
4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征是包被有包被抗原的微孔板(1)，其特征为48孔、96孔或其他孔数的可拆卸或不可拆卸微孔板。
5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征是包被有包被抗原的微孔板，其制备：将包被抗原以包被缓冲液稀释，每孔加入50-300μL置于4℃冰箱包被。次日将包被抗原的微孔板取出洗涤后每孔加50-300μL封闭液，置于25-40℃水浴锅封闭0.5-2小时后再洗涤，拍干，用真空密封在4℃下保存。
6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征是发光液(6)，该发光液包含T缓冲液、鲁米诺、对羟基苯丙烯酸、过硼酸钠。
7.一种用权利要求1所述的试剂盒检测氯霉素的方法，其特征是向微孔板中加入氯霉素标准溶液或处理好的样品和酶标抗体，温育洗涤后加入发光液检测发光值，以加入氯霉素标准品的发光值绘制标准曲线，以加入被测样品的发光值从标准曲线上计算被测样品中氯霉素的含量。
8.根据权利要求7所述的检测氯霉素的方法，其特征是操作为：向包被好的酶标板中每孔加入标准溶液或处理好的样品和酶标物，在25-40℃下温育15分钟。洗涤后，每孔加入发光液1-5分钟后在化学发光检测仪上检测。以所得的标准品发光值，除以第一个标准(0标准)的发光值再乘以100，得到抑制率(B/B0)，以抑制率为纵坐标，氯霉素浓度的对数为横坐标作标准曲线，每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。
9.根据权利要求7、8所述的检测氯霉素的方法，其特征是样品处理：
鱼虾样品：取10g去除脂肪的样品匀浆化，称量3g匀浆化的样品与6mL乙酸乙酯混合
10min，4000g离心5min，转移2mL乙酸乙酯上层到干净的玻璃管中，50℃温和氮气流蒸发乙酸乙酯，脂肪残留物溶于1mL正己烷混匀1min，并加入1mL样品稀释液。涡旋混合1min，
4000g离心分离5min。(注：如下层乳化，可将试管置于80℃水浴中5min左右，并再次进行离心)，弃去上层，吸取100μL下层溶液用于检测。最终检测结果应乘以稀释倍数1。

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