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基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的方法

发明专利有效专利
  • 申请号:
    CN201710153605.8
  • IPC分类号:C12N15/867
  • 申请日期:
    2017-03-15
  • 申请人:
    陕西师范大学
著录项信息
专利名称基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的方法
申请号CN201710153605.8申请日期2017-03-15
法律状态授权申报国家中国
公开/公告日2017-09-12公开/公告号CN107151677A
优先权暂无优先权号暂无
主分类号C12N15/867IPC分类号C;1;2;N;1;5;/;8;6;7查看分类表>
申请人陕西师范大学申请人地址
陕西省西安市长安南路199号 变更 专利地址、主体等相关变化,请及时变更,防止失效
权利人陕西师范大学当前权利人陕西师范大学
发明人夏海滨;李雅;张伟锋;朱久玲;李燕
代理机构西安恒泰知识产权代理事务所代理人李郑建
摘要
本发明公开了一种基于慢病毒表达CRISPR/Cas9高效敲除低转染率细胞的方法。该方法涉及两种慢病毒,一种是表达sgRNA及Cas9的慢病毒,另一种是表达Cre蛋白的慢病毒。将多基因的sgRNA及Cas9同时克隆至慢病毒载体的两个同向loxp之间,在低转染效率的细胞内实现多基因同时敲除,再利用表达Cre的慢病毒,对基因组中整合的Cas9及sgRNA进行有效去除,防止过度表达Cas9及sgRNA造成脱靶效应。本发明结合了慢病毒具备的能够高效感染分裂与非分裂细胞以及loxp‑Cre系统高效去除反应的特点,该系统具有毒性小、基因敲除效率高、准确性高,周期短等特点,对于在低转染效率的细胞系中实现多基因敲除意义重大。

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