基于金属钛离子亲和色谱的核酸-蛋白复合物提取方法

发明专利有效专利

申请号：
CN202110731083.1
IPC分类号：C07K1/22;C07K1/14;C07K1/113
申请日期：
2021-06-29
申请人：
上海交通大学

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专利名称	基于金属钛离子亲和色谱的核酸-蛋白复合物提取方法
申请号	CN202110731083.1	申请日期	2021-06-29
法律状态	公开	申报国家	中国
公开/公告日	2021-10-22	公开/公告号	CN113527410A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C07K1/22 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C07 有机化学〔2〕 C07K 肽（含有β-内酰胺的肽入C07D；在分子中除了形成本身的肽环外不含有任何其他的肽键的环状二肽，如哌嗪-2，5-二酮入C07D；环肽型麦角生物碱入C07D 519/02；单细胞蛋白质、酶入C12N；获得肽的基因工程方法入C12N 15/00）〔4〕 C07K1/00 肽的一般制备方法〔4〕 C07K1/14 提取；分离；纯化〔4，6〕 C07K1/16 通过色谱法〔6〕 C07K1/22 亲合色谱或基于选择性吸附方法相关的技术〔6〕	IPC分类号	C;0;7;K;1;/;2;2;;;C;0;7;K;1;/;1;4;;;C;0;7;K;1;/;1;1;3查看分类表>
申请人	上海交通大学	申请人地址	上海市闵行区东川路800号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	上海交通大学	当前权利人	上海交通大学
发明人	肖华;王惠雨;张岩
代理机构	上海段和段律师事务所	代理人	李佳俊;郭国中

摘要

本发明公开了一种基于金属钛离子亲和色谱的核酸‑蛋白复合物提取方法，该方法包括如下步骤：步骤S1：甲醛处理活细胞，在核酸和与之相互作用的蛋白间形成共价键；步骤S2：用Trizol裂解交联后的细胞，并通过异丙醇沉淀获得核酸‑蛋白复合物的粗提物；步骤S3：利用Ti4+‑IMAC和核酸上磷酸基团之间的选择性作用捕获核酸‑蛋白复合物；步骤S4：将步骤S3中得到的核酸‑蛋白复合物解交联后，对核酸结合相关蛋白进行质谱分析。本发明根据钛离子和核酸上磷酸基团之间的相互作用，可以特异性地捕获核酸‑蛋白复合物，可以显著降低全细胞蛋白质组的复杂程度，从而减少高丰度蛋白干扰，有助于发现特异性核酸结合相关蛋白。

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