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巢式一步法RT-PCR从单个B细胞扩增鼠源抗体重链和轻链可变区基因全序列的方法

发明专利有效专利
  • 申请号:
    CN201210438816.3
  • IPC分类号:C12N15/13C12N15/10
  • 申请日期:
    2012-11-07
  • 申请人:
    杭州鸿运华宁生物医药工程有限公司
著录项信息
专利名称巢式一步法RT-PCR从单个B细胞扩增鼠源抗体重链和轻链可变区基因全序列的方法
申请号CN201210438816.3申请日期2012-11-07
法律状态暂无申报国家中国
公开/公告日2013-05-01公开/公告号CN103074349A
优先权暂无优先权号暂无
主分类号C12N15/13IPC分类号C12N15/13;C12N15/10查看分类表>
申请人杭州鸿运华宁生物医药工程有限公司申请人地址
浙江省杭州市滨江区秋溢路288号东冠高新科技园2号楼3楼3*** 变更 专利地址、主体等相关变化,请及时变更,防止失效
权利人北京师范大学,鸿运华宁(杭州)生物医药有限公司当前权利人北京师范大学,鸿运华宁(杭州)生物医药有限公司
发明人张成;药晨江;景书谦
代理机构杭州杭诚专利事务所有限公司代理人林宝堂
摘要
本发明涉及基因工程领域,目的在于提供一种巢式一步法RT-PCR从单个B细胞扩增鼠源抗体重链和轻链可变区基因全序列的方法。本发明根据NCBI和VBASE的小鼠免疫球蛋白重链和轻链的V基因序列设计兼并引物,可以特异性地扩增得到囊括所有V基因种类的DNA序列。然后通过特定的接头DNA片段(Linker接头)将重链和轻链的可变区基因序列连接在一起,再通过巢式PCR进行扩增,并带入酶切位点,可以克隆到特定的双向表达载体,进行真核表达。本发明优点为:覆盖面广,灵敏度高,效率高,通量大,步骤简单,简化劳动,降低成本,应用范围广,结果可靠。

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