一种表达shRNA的AAV辅助包装载体、构建筛选方法和应用

发明专利无效专利

申请号：
CN201910443566.4
IPC分类号：C12N15/861;C12N15/66;C12N7/00
申请日期：
2019-05-27
申请人：
广州派真生物技术有限公司

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专利名称	一种表达shRNA的AAV辅助包装载体、构建筛选方法和应用
申请号	CN201910443566.4	申请日期	2019-05-27
法律状态	驳回	申报国家	中国
公开/公告日	2019-08-30	公开/公告号	CN110184297A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/861 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/79 专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统〔5〕 C12N15/85 用于动物细胞〔5〕 C12N15/86 病毒载体〔5〕 C12N15/861 腺病毒载体〔7〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;8;6;1;;;C;1;2;N;1;5;/;6;6;;;C;1;2;N;7;/;0;0查看分类表>
申请人	广州派真生物技术有限公司	申请人地址	广东省广州市高新技术产业开发区科学城揽月路3号广州国际企业孵化器G区304房变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	广州派真生物技术有限公司	当前权利人	广州派真生物技术有限公司
发明人	李华鹏
代理机构	广州胜沃园专利代理有限公司	代理人	张帅

摘要

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种表达shRNA的AAV辅助包装载体及该载体的构建方法、筛选方法和应用；所述载体基于Rep2与CapDJ辅助包装载体，在CMV启动子驱动下的miR33‑5’UTR和miR33‑3’UTR之间插入克隆shRNA的位点2×BsmBI，shRNA表达小片段连接入所述骨架载体的2xBsmBI位点。所述载体的构建方法包括：制备克隆用骨架；制备shRNA表达小片段；将shRNA表达小片段连接至克隆用骨架载体上。所述筛选方法包括：用所述载体转化Stbl3感受态细菌，质粒提取；将提取的质粒共转染293T细胞；滴度比较筛选。本发明实现提高AAV生产效率约60％以上。

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