外源基因定点整合至GAPDH基因下游的打靶载体构建方法及其应用

发明专利有效专利

申请号：
CN201910559340.0
IPC分类号：C12N15/85;C12N15/90;C12N15/113
申请日期：
2019-06-25
申请人：
华中农业大学

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专利名称	外源基因定点整合至GAPDH基因下游的打靶载体构建方法及其应用
申请号	CN201910559340.0	申请日期	2019-06-25
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2019-10-08	公开/公告号	CN110305899A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/85 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/79 专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统〔5〕 C12N15/85 用于动物细胞〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;1;5;/;9;0;;;C;1;2;N;1;5;/;1;1;3查看分类表>
申请人	华中农业大学	申请人地址	湖北省武汉市洪山区狮子山街1号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	华中农业大学	当前权利人	华中农业大学
发明人	阮进学;韩晓松;赵书红;熊友才;庄荣志;赵长志;余梅;李新云;李长春;谢胜松;付亮亮;赵云霞
代理机构	武汉宇晨专利事务所	代理人	江丽丽;王敏锋

摘要

本发明公开了一种将外源基因定点整合至猪GAPDH基因下游的打靶载体，所述打靶载体是以GAPDH基因终止密码子上下游序列作为左、右同源臂，将左同源臂、2A序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来，反向插入到真核表达载体的多克隆位点上。将该打靶载体与含特异性靶向猪GAPDH基因下游的sgRNA的CRISPR/Cas9切割载体共转染猪真核细胞中，可以将外源基因定点整合至GAPDH基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因在猪基因组中高效稳定的表达奠定基础。

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