溶液相合成低聚核苷酸的结构单元

1.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷选择性脱保护的方法，该方法包 括：
a.选择对所述核苷的乙酰丙酰基位置能直接有效的区域选择性水 解的水解酶；和
b.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与所述的水解酶在有效地生成相 应的3′-O-乙酰丙酰基和5′-O-乙酰丙酰基核苷的条件下接触一定时间
2.权利要求1的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
3.权利要求2的方法，其中所述的脂酶是CAL-A、CAL-B、 PSL-C、猪胰脂肪酶(porcine pancreatic lipase)，粘稠色杆菌 (Chromobactenaum viscosum)脂酶、米赫毛霉(Mucor miehei)脂 酶，Humicola lanuginosa脂酶，沙门氏柏干酪青霉(Penicillium camemberti)脂酶或皱落念珠菌(Candida rugosa)脂酶。
4.权利要求3的方法，其中所述的脂酶是CAL-A。
5.权利要求3的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
6.权利要求3的方法，其中所述的脂酶是PSL-C。
7.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在5’-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，该方法包括选择对所述3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的 5’-乙酰丙酰基位置能直接有效的区域选择性水解的水解酶，和使所述 的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与所述的水解酶在有效地生成3′-O-乙酰 丙酰基核苷时间和的条件下接触。
8.权利要求7的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
9.权利要求8的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
10.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在3’-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，该方法包括选择对所述3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的 3’-乙酰丙酰基位置能直接有效的区域选择性水解的水解酶，和使所述3′， 5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与所述的水解酶在有效地生成相应的5′-O-乙 酰丙酰基核苷的时间和条件下接触。
11.权利要求10的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
12.权利要求11的方法，其中所述的脂酶是CAL-A。
13.权利要求11的方法，其中所述的脂酶是PSL-C。
14.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在5’-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，该方法包括选择对所述3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的 5’-乙酰丙酰基位置能直接有效的区域选择性水解的水解酶，和使所述3′， 5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与所述的水解酶在有效地生成3′-O-乙酰丙酰 基核苷的时间和条件下接触，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 为下式之一：

其中
R1是-H，-羟基，保护的羟基，或2′-取代基；和
R2和R3各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3。
15.权利要求14的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
16.权利要求15的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
17.权利要求14的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 是腺苷、胞嘧啶、胸苷或N-异丁基鸟苷。
18.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在3’-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，该方法包括选择对所述3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的 3’-乙酰丙酰基位置能直接有效的区域选择性水解的水解酶，和使所述3′， 5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与所述的水解酶在有效地生成5′-O-乙酰丙酰 基核苷的时间和条件下接触，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 为下式之一：

其中
R6是-H或-OH；
R2、R3、R4和R5各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3。
19.权利要求18的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
20.权利要求19的方法，其中所述的脂酶是CAL-A。
21.权利要求19的方法，其中所述的脂酶是PSL-C。
22.权利要求18的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 是3′，5′-二-O-乙酰丙酰基胸苷、3′，5′-二-O-乙酰丙酰基胞嘧啶或3′，5′- 二-O-乙酰丙酰基N-苯甲酰基腺苷。
23.权利要求22的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 是N-异丁基鸟苷。
24.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在5′-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷为下式之一：

其中
R1是-H，-羟基，保护的羟基，或2′-取代基；和
R2和R3各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3；
该方法包括使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与CAL-B在有效地水 解所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件下接触。
25.权利要求24的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 包括腺苷、胞嘧啶、胸苷或N-异丁基鸟苷部分。
26.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在3’-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷为下式之一：

其中
R6是-H或-OH；
R2、R3、R4和R5各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3；
该方法包括使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与PSL-C在有效地水解 所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件下接触。
27.权利要求26的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 包括N-异丁基鸟苷部分。
28.使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷在3’-O-乙酰丙酰基位置选择性 脱保护的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷为下式之一：

其中
R6是-H或-OH；
R2、R3、R4和R5各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3；
该方法包括使3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷与CAL-A在有效地水 解所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件下接触。
29.权利要求28的方法，其中所述的3′，5′-二-O-乙酰丙酰基核苷 包括胸苷、胞嘧啶、或N-苯甲酰基腺苷部分。
30.至少保护核酸2′-O-3′-O或5′-O的一个羟基部分的方法，该方 法包括使所述核酸与乙酰丙酸在有连接于高分子载体的偶合剂存在 下，和在使2′-O、3′-O或5′-O位有效地形成酯的时间和条件下反应。
31.权利要求30的方法，其中所述的核酸是核苷。
32.权利要求30的方法，其中所述的偶合剂是碳二亚胺。
33.权利要求32的方法，其中所述的碳二亚胺是环己基碳二亚胺。
34.权利要求30的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯。
35.权利要求30的方法，其中所述的高分子载体是聚乙二醇。
36.至少酰化碳水化合物的一个羟基部分的方法，该方法包括使 所述的碳水化合物与乙酰丙酸在有连接于高分子载体的偶合剂存在 下，和能有效地形成酯的时间和条件下反应。
37.权利要求36的方法，其中所述的偶合剂是碳二亚胺。
38.权利要求37的方法，其中所述的碳二亚胺是环己基碳二亚胺。
39.权利要求36的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯载体。
40.权利要求36的方法，其中所述的高分子载体是聚乙二醇载体。
41.至少酰化类固醇分子的一个羟基部分的方法，该方法包括使 所述的类固醇分子与乙酰丙酸在有连接于高分子载体的偶合剂存在 下，和能有效地形成酯的时间和条件下反应。
42.权利要求41的方法，其中所述的偶合剂是碳二亚胺。
43.权利要求42的方法，其中所述的碳二亚胺是环己基碳二亚胺。
44.权利要求41的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯载体。
45.权利要求41的方法，其中所述的高分子载体是聚乙二醇载体。
46.保护下式化合物的羟基的方法，

其中
Bx是核碱基；
T1和T2各自独立地是OH、羟基保护基团、活化的磷酸酯基、 核苷酸、核苷或低聚核苷酸；
R是-H、-羟基、保护的羟基或2′-取代基；
条件是T1、T2或R中至少一个是-OH；
该方法包括使所述的化合物与乙酰丙酸在有连接于高分子载体的 偶合剂存在下，和在能使所述羟基部分和乙酰丙酰基部分之间有效地 形成酯的时间和条件下反应。
47.权利要求46的方法，其中所述的偶合剂是碳二亚胺。
48.权利要求47的方法，其中所述的碳二亚胺是环己基碳二亚胺。
49.权利要求46的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯载体。
50.权利要求46的方法，其中所述的高分子载体是聚乙二醇载体。
51.保护下式化合物的3′-O或5′-O位的方法：

其中
Bx是核碱基；
R是-H或2′-取代基；
该方法包括使所述的化合物与乙酰丙酸在有连接于固体载体的偶 合剂存在下，和在能有效地形成下式化合物的时间和条件下反应：

其中Lev是乙酰丙酰基。
52.权利要求51的方法，其中所述的连接于高分子载体的偶合 剂是连接于高分子载体的环己基碳二亚胺。
53.权利要求52的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯高分 子载体。
54.保护下式化合物的3′-O或5′-O位的方法：

其中
Bx是核碱基；
R是-H或2′-取代基；
该方法包括使所述的化合物与乙酰丙酸在有连接于聚苯乙烯该分 子载体的环己基碳二亚胺存在下，和能有效地形成下式化合物的时间 和条件下反应：

其中Lev是乙酰丙酰基。
55.酰化羟基部分的方法，该方法包括使所述的羟基部分与乙酰 丙酸在有连接于高分子载体的偶合剂存在下，和能有效形成酯的时间 和条件下反应。
56.权利要求55的方法，其中所述的偶合剂是碳二亚胺。
57.权利要求56的方法，其中所述的碳二亚胺是环己基碳二亚 胺。
58.权利要求55的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯。
59.权利要求55的方法，其中所述的高分子载体是聚乙二醇。
60.由环己基脲衍生的高分子载体制备环己基碳二亚胺衍生的高 分子载体的方法，该方法包括使所述环己基脲衍生的高分子载体与脱 水剂在有机溶剂中，和在有效地形成所述环己基碳二亚胺衍生的高分 子载体的时间和条件下反应。
61.权利要求60的方法，其中所述的脱水剂是POCl3。
62.权利要求61的方法，其中所述的脱水剂是甲苯磺酰氯。
63.权利要求62的方法，其中所述的有机溶剂是CH2Cl2、 CHCl3、己烷或吡啶。
64.权利要求61的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯高 分子载体。
65.由环己基脲衍生的高分子载体制备环己基碳二亚胺衍生的高 分子载体的方法，该方法包括以下步骤：
a.使所述环己基脲衍生的高分子载体与脱水剂在有机溶剂中，和 在有效地形成盐的时间和条件下反应；和
b.使所述的盐与水溶液接触以生成所述的环己基碳二亚胺衍生 的高分子载体。
66.权利要求65的方法，其中所述的脱水剂是POCl3。
67.权利要求65的方法，其中所述的脱水剂是甲苯磺酰氯。
68.权利要求65的方法，其中所述的有机溶剂是CH2Cl2、 CHCl3、己烷或吡啶。
69.权利要求65的方法，其中所述的高分子载体是聚苯乙烯高 分子载体。
70.使核苷选择性酰化的方法，该方法包括：
a.选择对所述核苷的5’-或3’-位能直接有效的区域选择性酰化的 水解酶；和
b.使所述核苷与酰化剂在该水解酶存在下，和在有效地生成选自 3′-O-乙酰丙酰基核苷和5′-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件下接触。
71.权利要求70的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
72.权利要求71的方法，其中所述的脂酶是CAL-A、CAL-B、 PSL-C、猪胰脂肪酶(porcine pancreatic lipase)，粘稠色杆菌脂酶 (Chromobactenaum viscosum)、米赫毛霉(Mucor miehei)脂酶， Humicola lanuginosa脂酶，沙门氏柏干酪青霉(Penicillium camemberti)脂酶或皱落念珠菌(Candida rugosa)脂酶。
73.权利要求72的方法，其中所述的脂酶是CAL-A。
74.权利要求72的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
75.权利要求72的方法，其中所述的脂酶是PSL-C。
76.使核苷在5’-位选择性酰化的方法，该方法包括选择对所述核 苷的5’-位能直接有效的区域选择性酰化的水解酶，和使所述核苷在所 述水解酶存在下和在有效地生成5′-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件 下，与酰化剂接触。
77.权利要求76的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
78.权利要求77的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
79.使核苷在3’-位选择性酰化的方法，该方法包括选择对所述核 苷的3’-位能直接有效的区域选择性酰化的水解酶，和使所述核苷在所 述水解酶存在下和在有效地生成3′-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件 下，与酰化剂接触。
80.权利要求79的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
81.权利要求80的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
82.权利要求80的方法，其中所述的脂酶是PSL-C。
83.使核苷在5’-位选择性酰化的方法，该方法包括选择对所述核 苷的5’-位能直接有效的区域选择性酰化的水解酶，和使所述核苷在所 述水解酶存在下和在有效地生成5′-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件 下，与酰化剂接触，所述的核苷为下式之一：

其中
R1是-H，-羟基，保护的羟基，或2′-取代基；和
R2和R3各自独立地是-H或氨基保护基团；和
G是N或CH。
84.权利要求83的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
85.权利要求84的方法，其中所述的脂酶是CAL-B。
86.权利要求83的方法，其中所述的核苷是腺苷、胞嘧啶、胸 苷或N-异丁基鸟苷。
87.使核苷在3’-位选择性酰化的方法，该方法包括选择对所述核 苷的3’-位能直接有效的区域选择性酰化的水解酶，和使所述核苷在所 述水解酶存在下和在有效地生成3′-O-乙酰丙酰基核苷的时间和条件 下，与酰化剂接触，所述的核苷为下式之一：

其中
R6是-H或-OH；
R2、R3、R4和R5各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3。
88.权利要求87的方法，其中所述的水解酶是脂酶。
89.权利要求88的方法，其中所述的脂酶是CAL-A。
90.权利要求88的方法，其中所述的脂酶是PSL-C。
91.权利要求87的方法，其中所述的核苷是胸苷、胞嘧啶或N- 异丁基腺苷。
92.权利要求91的方法，其中所述的核苷是N-异丁基鸟苷。
93.使核苷在5’-位选择性酰化的方法，其中所述的核苷为下式之 一：

其中
R1是-H，-羟基，保护的羟基，或2′-取代基；和
R2和R3各自独立地是-H或氨基保护基团；和
G是N或CH；
该方法包括使所述的核苷在有效地酰化所述核苷5′-位的时间和 条件下与酰化剂和CAL-B接触。
94.权利要求93的方法，其中所述的核苷包括腺苷、胞嘧啶、 胸苷或N-异丁基鸟苷部分。
95.使核苷在3’-位选择性酰化的方法，其中所述的核苷为下式之 一：

其中
R6是-H或-OH；
R2、R3、R4和R5各自独立地是-H或氨基保护基团；
G是N或CH；和
Lev是-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3；
该方法包括使所述核苷在PSL-C存在下和有效地酰化所述核苷3′- 位的时间和条件下，与酰化剂接触。
96.权利要求95的方法，其中所述的核苷包括N-异丁基鸟苷部 分。
97.使核苷在3’-位选择性酰化的方法，其中所述的核苷为下式之 一：

其中
R6是-H或-OH；
R2、R3、R4和R5各自独立地是-H或氨基保护基团；和
G是N或CH；
该方法包括使所述核苷在有效地酰化所述核苷3′-位的时间和条 件下，与CAL-A接触。
98.权利要求97的方法，其中所述的核苷包括胸苷、胞嘧啶或 N-异丁基腺苷部分。

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