一种构建人TCRbetaCDR3区文库的方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201710985272.5
IPC分类号：C12N15/10;C40B50/06
申请日期：
2017-10-20
申请人：
重庆天科雅生物科技有限公司

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专利名称	一种构建人TCRbetaCDR3区文库的方法
申请号	CN201710985272.5	申请日期	2017-10-20
法律状态	暂无	申报国家	中国
公开/公告日	2018-04-10	公开/公告号	CN107893068A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/10 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/10 分离、制备或纯化DNA或RNA的方法（DNA或RNA的化学制备入C07H21/00；自微生物中或用酶制备非结构多核苷酸入C12P19/34）〔5，2006.01〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;1;0;;;C;4;0;B;5;0;/;0;6查看分类表>
申请人	重庆天科雅生物科技有限公司	申请人地址	广东省广州市南沙区珠江街南江二路6号自编12栋变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	广东天科雅生物医药科技有限公司	当前权利人	广东天科雅生物医药科技有限公司
发明人	于海礼;吴海阳;袁江北;仇鑫;谭颖
代理机构	重庆上义众和专利代理事务所（普通合伙）	代理人	孙人鹏

摘要

本发明涉及一种构建人TCR beta CDR3区测序文库的方法，主要步骤包括：(1)提取人组织或全血总RNA。(2)逆转录RNA为cDNA，将接头序列连接到长链cDNA末端，通过通用C端引物和接头序列引物扩增包含CDR3区的TCR beta。(3)通过Tn5转座酶打断TCR beta并富集CDR3区序列。(4)通过illumina高通量测序平台进行测序。本方法适用于含有各类T细胞的组织，体液等样本的建库；采用5’RACE技术，可高效的无偏差的对人TCR beta进行扩增，克服了多重PCR扩增所引起的模板拷贝数和扩增效率难以控制，产物发生偏移等问题；利用Tn5酶能将DNA打断和接头连接同步完成的功能和使用特异性的引物可对TCR beta的高度可变区(CDR3区)进行快速准确的富集建库，使测序更有针对性，方便数据分析，节约测序成本。

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