一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌及其构建方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201910746510.6
IPC分类号：C12N1/21;C12N15/70;C12N15/90;C12N15/31;C12R1/19
申请日期：
2019-08-12
申请人：
广东省农业科学院动物科学研究所

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专利名称	一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌及其构建方法
申请号	CN201910746510.6	申请日期	2019-08-12
法律状态	授权	申报国家	中国
公开/公告日	2019-12-10	公开/公告号	CN110551668A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N1/21 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N1/00 微生物本身，如原生动物；及其组合物（含有由原生动物、细菌或病毒得到的材料的药物的制备入A61K35/66；从藻类材料制备药物的入A61K36/02；从真菌中材料制备药物的入A61K36/06；药用细菌的抗原或抗体组合物的制备，如细菌菌苗入A61K39/00）；繁殖、维持或保藏微生物或其组合物的方法；制备或分离含有一种微生物的组合物的方法；及其培养基〔3，2006.01〕 C12N1/20 细菌；其培养基〔3〕 C12N1/21 引入外来遗传物质修饰的〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;/;2;1;;;C;1;2;N;1;5;/;7;0;;;C;1;2;N;1;5;/;9;0;;;C;1;2;N;1;5;/;3;1;;;C;1;2;R;1;/;1;9查看分类表>
申请人	广东省农业科学院动物科学研究所	申请人地址	广东省广州市天河区五山路大丰一街1号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	广东省农业科学院动物科学研究所	当前权利人	广东省农业科学院动物科学研究所
发明人	邓盾;马现永;吕晓慧;檀克勤
代理机构	广州三环专利商标代理有限公司	代理人	颜希文;宋静娜

摘要

本发明公开了一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌的构建方法，包括如下步骤：1)构建LT基因同源重组供体LT donar，LT donar的碱基序列依次包括L‑arm、cat promoter、CmR、sgCommon、PAM、L‑short、R‑arm多核苷酸片段；以及2)制备含pCas‑Red质粒的感受态细胞，加入步骤1)的LT donar进行转化，然后筛选阳性克隆，即得无痕敲除了热不稳定肠毒素基因LT的大肠杆菌。本发明将Crispr/Cas9与λ‑Red同源重组系统结合，成功地对产肠毒大肠杆菌K88的LT基因进行无痕敲除，突变菌株丧失溶血能力，减缓生长；利用本发明的方法可快速、便捷的对产肠毒大肠杆菌K88基因进行无痕敲除，为研究LT功能提供了坚实的研究基础。

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该专利没有引用任何外部专利数据！

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