一种山核桃生长素输出载体蛋白CcPILS基因克隆及表达分析方法

发明专利无效专利

申请号：
CN201611081459.4
IPC分类号：C12N15/29;C12N15/10;C12Q1/68
申请日期：
2016-11-30
申请人：
浙江农林大学

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专利名称	一种山核桃生长素输出载体蛋白CcPILS基因克隆及表达分析方法
申请号	CN201611081459.4	申请日期	2016-11-30
法律状态	驳回	申报国家	中国
公开/公告日	2017-04-26	公开/公告号	CN106591321A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/29 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/11 DNA或RNA片段；其修饰形成（不用于重组技术的DNA或RNA入C07H 21/00）〔5〕 C12N15/29 编码植物蛋白质，如奇甜蛋白（thaumatin）的基因〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;2;9;;;C;1;2;N;1;5;/;1;0;;;C;1;2;Q;1;/;6;8查看分类表>
申请人	浙江农林大学	申请人地址	浙江省杭州市临安市锦城镇环城北路88号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	浙江农林大学	当前权利人	浙江农林大学
发明人	郑炳松;高柳肖;郭文彬;闫道良;袁虎威;赵亮;徐栋斌;童亚菲
代理机构	北京天奇智新知识产权代理有限公司	代理人	韩洪

摘要

本发明公开了一种山核桃生长素输出载体蛋白CcPILS基因克隆及表达分析方法，包括以下步骤：准备材料、RNA提取与纯化、CcPILS基因RACE、生物信息学分析和时空表达分析。本发明利用RACE方法，克隆出山核桃PIL同源基因CcPILS，该基因全长序列1541bp，其中开放阅读框序列1263bp，应用生物信息学软件分析，预测该序列编码420个氨基酸，CcPILS蛋白分子量约为46.22KD，PI为5.38，定位在内质网膜，N、C两端各有5个跨膜疏水结构域，被中间的亲水环所分隔，该基因与拟南芥AtPILS5、AtPILS7具有较高同源性，属于PILS基因家族中的CladeIII亚族，荧光定量RT‑PCR分析表明，在山核桃嫁接前后，CcPILS在接穗中表达趋势和在砧木中的表达一致，对山核桃嫁接难、品种选育困难、品质难以提高等问题的解决提供了有利的促进作用。

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