CCN1组合物和方法

血管生成诱导物CCN1(富半胱氨酸61，CYR61)为CCN家族的分泌基质细胞蛋白，为包括α6β1的多种整联蛋白的配基。先前的研究已经表明CCN1与整联蛋白α6β1的相互作用介导成纤维细胞、内皮细胞和平滑肌细胞的细胞粘附，以及平滑肌细胞的迁移。最近，我们报道了未激活内皮细胞的CCN1诱导性小管形成也通过整联蛋白α6β1介导。在本研究中，我们证明人皮肤成纤维细胞特异性粘附CCN1域III中的T1序列(GQKCIVQTTSWSQCSKS，SEQ ID No：2)，而且这个过程被抗a6和抗b1单克隆抗体所阻断。T1序列的丙氨酸置换诱变进一步确定序列TTSWSQCSKS(SEQ ID No：1)为介导α6β1依赖性粘附的关键性决定子。可溶性T1肽以剂量依赖性方式特异性地抑制成纤维细胞粘附至CCN1。而且，T1也抑制细胞粘附至其它的α6β1配基，包括CCN2(CTGF)、CCN3(NOV)和层粘连蛋白，但不抑制其它整联蛋白的配基。此外，在包含CCN1的胶原凝胶基质中，T1特异性抑制未活化内皮细胞的α6β1依赖性小管形成。为了证实T1直接结合整联蛋白α6β1，我们进行了亲和层析，表明在偶联T1的Affi-gel上从成纤维细胞的辛基葡糖苷提取物中分离得到整联蛋白α6β1。综合起来，这些发现确定CCN1中的T1序列为新的整联蛋白α6β1结合基序，对于开发肽模拟物形成了检测α6β1在血管生成中的功能作用的基础。