一种检测环丙沙星残留的胶体金层析试纸及其制备方法

1.一种检测环丙沙星残留的胶体金层析试纸，包括硝酸纤维素膜(1)、样品垫(4)、胶体金结合垫(3)、吸水垫(2)、PVC背衬(5)，所述的胶体金结合垫上包被有环丙沙星单克隆抗体-胶体金标记物，其特征在于所述的环丙沙星单克隆抗体-胶体金标记物中的环丙沙星单克隆抗体是由杂交瘤细胞株JY-1(CCTCC NO.C200947)分泌获得。
2.一种如权利要求1所述的胶体金层析试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将环丙沙星结合到牛血清白蛋白上，制备环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物；
(2)利用环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物免疫小鼠，将免疫小鼠的脾细胞和SP/O细胞进行融合、筛选、克隆，得到分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
(3)提取小鼠IgG免疫山羊，得到羊抗鼠IgG；
(4)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
(5)将环丙沙星单克隆抗体加入制备好的胶体金中，得到环丙沙星单克隆抗体-胶体金标记物；
(6)将制备的环丙沙星单克隆抗体-胶体金标记物稀释后，添加至胶体金结合垫，在
37℃烘箱放置1小时；
(7)将环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物和羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上，制备检测区(T)和质控区(C)，并用牛血清白蛋白封闭，37℃烘干；
(8)在PVC背衬上按照顺序贴上硝酸纤维素膜(1)、吸水垫(2)、胶体金结合垫(3)和样品垫(4)，将样品垫(4)盖住胶体金结合垫(3)，最后切成小条，加上塑料盒成品，真空包装。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物是通过碳二亚胺法将环丙沙星偶联到牛血清白蛋白上。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的碳二亚胺法包括如下步骤：
(1)配制PH为5.0，含量为0.01mol/L的磷酸缓冲液；
(2)配制8mg/mL的牛血清白蛋白水溶液；
(3)配制20mg/mL的环丙沙星水溶液；
(4)配制240mg/mL的碳二亚胺水溶液；
(5)等体积比例混合上述的牛血清白蛋白水溶液、环丙沙星水溶液、碳二亚胺水溶液、磷酸缓冲液，在室温下反应2小时；
(6)将反应好的液体加入截留分子量14000的透析袋，用上述磷酸缓冲液透析48小时，至少换液一次；
(7)将透析好的液体，在-20℃预冷冻2-5小时，然后在-50℃下冷冻干燥，制成环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物固体粉末。

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